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凝胶排阻色谱法
阅读:521时间:2018-06-02 17:39:56

  排阻色谱法也称空间排阻色谱或凝胶渗透色谱法,是一种根据试样分子的尺寸进行分离的色谱技术。排阻色谱的色谱柱的填料是凝胶,它是一种表面惰性,含有许多不同尺寸的孔穴或立体网状物质。凝胶的孔穴仅允许直径小于孔开度的组分分子进入,这些孔对于流动相分子来说是相当大的,以致流动相分子可以自由地扩散出入。对不同大小的组分分子,可分别渗入到凝胶孔内的不同深度,大个的组分分子可以渗入到凝胶的大孔内,但进不了小孔甚至于完全被排斥。小个的组分分子,大孔小孔都可以渗入,甚至进入很深,一时不易洗脱出来。因此,大的组分分子在色谱柱中停留时间较短,很快被洗脱出来,它的洗脱体积很小,小的组分分子在色谱柱中停留时间较长,洗脱体积较大,直到所有孔内的最小分子到达柱出口,完成按分子大小而分离的洗脱过程。尺寸排阻色谱被广泛应用于大分子的分级,即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。

目录

简介

  排阻色谱的固定相一般可分为软性、半刚性和刚性凝胶三类。所谓凝胶,指含有大量液体(一般是水)的柔软而富有弹性的物质,它是一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体。
  (1)软性凝胶如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶都具有较小的交联结构,其微孔能吸入大量的溶剂,并能溶涨到它干体的许多倍。它们适用于水溶性作流动相,一般用于小分子质量物质的分析,不适宜在高效液相色谱中。
  (2)半刚性凝胶如高交联度的聚苯乙烯。常以有机溶剂作流动相。
  (3)刚性凝胶如多孔硅胶、多孔玻璃等,它们既可用水溶性溶剂,又可用有机溶剂作流动相,可在较高压强和较高流速下操作。
  第九节色谱分离方法的选择
  要正确地选择色谱分离方法,首先必须尽可能多的了解样品的有关性质,其次必须熟悉各种色谱方法的主要特点及其应用范围。选择色谱分离方法的主要根据是样品的相对分子质量的大小,在水中和有机溶剂中的溶解度,极性和稳定程度以及化学结构等物理、化学性质。
  一、相对分子质量
  对于相对分子质量较低(一般在200以下),挥发性比较好,加热又不易分解的样品,可以选择气相色谱法进行分析。相对分子质量在200~2000的化合物,可用液固吸附、液-液分配和离子交换色谱法。相对分子质量高于2000,则
  可用空间排阻色谱法。
  二、溶解度
  水溶性样品最好用离子交换色谱法和液液分配色谱法;微溶于水,但在酸或碱存在下能很好电离的化合物,也可用离子交换色谱法;油溶性样品或相对非极性的混合物,可用液-固色谱法。
  三、化学结构
  若样品中包含离子型或可离子化的化合物,或者能与离子型化合物相互作用的化合物(例如配位体及有机螯合剂),可首先考虑用离子交换色谱,但空间排阻和液液分配色谱也都能顺利地应用于离子化合物;异构体的分离可用液固色谱法;具有不同官能团的化合物、同系物可用液液分配色谱法;对于高分子聚合物,可用空间排阻色谱法。
  色谱法基本要求:
  1、掌握色谱法的分类,色谱流出曲线及有关术语;
  2、掌握色谱法的基本理论,了解柱效的影响因素;
  3、掌握分离度与柱效、选择因子、容量因子、分析时间之间关系;
  4、了解定性、定量分析方法;
  5、掌握气相色谱流程及气相色谱仪的结构;
  6、掌握气相色谱固定相的特性;
  7、掌握检测器性能指标的描述方法;
  8、掌握液相色谱仪的基本结构及基本概念;
  色谱法基本要求
  9、了解液相色谱法的主要类型及固定相、流动相的选择。
  10、了解色谱方法选择。

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